Tsunade es la nieta del primer Hokage y Mito Uzumaki, y la sobrina nieta del Segundo Hokage, lo que otros personajes para llamar a su "princesa" (姫, Hime). Ella es, junto con Jiraiya y Orochimaru, antigua alumna del Tercer Hokage Hiruzen Sarutobi y son considerados los tres legendarios Sannin. Tsunade es muy conocida por sus pechos extremadamente grandes (106 centímetros, según la estimación de Jiraiya), a pesar de que Jiraiya se refiere a ella como "Tsunade pecho plano" durante su infancia
Tsunade junto a Orochimaru cuando eran niños
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Durante la Segunda Gran Guerra Shinobi, Tsunade y sus ex compañeros lucharon contra Hanzō, que les dio el título de "Tres legendarios Shinobi de Konoha " (伝説 の 三 忍, Densetsu no Sannin) como recompensa por sobrevivir a la contienda de la batalla. En su camino de vuelta a Konoha, se encontraron con los Huérfanos de la Lluvia, que Jiraiya optó por entrenar. A lo largo de la guerra, ella se hizo famosa por sus frecuentes intentos de contrarrestar las intoxicaciones de Chiyo, la cual desarrollo unos venenos para las marionetas, ganando el desprecio de Chiyo por ello. Además, según Jiraiya, Tsunade fue la razón por la que Konoha ganó la guerra.
Tsunade junto a su Hermano en su JuventudEn algún punto de la historia, entre la segunda y la tercera guerras Shinobi, Tsunade le dio a su hermano, Nawaki, un collar de cristal como regalo de cumpleaños, para que le ayudara a cumplir su sueño de convertirse en Hokage; este collar le pertenecía a su abuelo, Hashirama Senju, y tenía un poder especial en su interior. Tiempo después, Nawaki muere en la guerra y el collar que llevaba en el cuello volvió a posesión de Tsunade.
Más tarde, Tsunade se enamoró de un hombre llamado Dan, que al igual que Nawaki quería convertirse en Hokage y Tsunade como muestra de afecto le regala el collar de su abuelo a Dan, quien también cae en batalla al poco tiempo de usar el collar; como consecuencia de esta muerte, Tsunade padece hemofobia (miedo a la sangre), que la hacía no apta para participar en más batallas.
Tsunade llegó a pensar que el collar estaba maldito, y que no podría darle a otra persona, pues aquel a quien regalara el collar, moriría al poco tiempo; además perdió la fe en las enseñanzas de su maestro, el Tercer Hokage y abandonó Konoha con la sobrina de Dan, Shizune, convirtiéndose en su aprendiz.